Análisis de beta-glucosidasa en sangre seca recolectada en papel filtro (DBS), reporte de un nuevo método aplicado a población control y pacientes con sospecha de enfermedad de Gaucher

Resumen

La enfermedad de Gaucher (GD) es el trastorno de almacenamiento lisosomal que se caracteriza por la deficiencia en la actividad enzimática de la β-glucosidasa (BGLU), lo que produce la acumulación de glucosilceramida en las células. Su diagnóstico se orienta a la valoración de la enzima en los leucocitos afectados. Se han realizado estudios en DBS para la actividad de BGLU en el seguimiento de poblaciones de alto riesgo; sin embargo, presentan interferencias relacionadas a leucopenias severas o expresión aumentada de la isoforma neutra de la enzima BGLU, molécula no relacionada con GD. El objetivo de este estudio fue la estandarización de un método de tamizaje en DBS (punch: 5 mm) con el uso de 4-metilumbeliferil-β-D-glucósido y conduritol-β-epóxido. Se analizaron muestras de dbs de 395 individuos con sospecha clínica (población de alto riesgo o AR), 151 controles y 16 pacientes afectados, usando la elución de un corte de 5 mm (≈10 μl de sangre) en 300 μl de Tritón X-100/(0,5 %). Como resultados, se obtuvieron los rangos, AR: 0,84-26,92 nmol/ml/h, controles: 3,56- 8,92 nmol/ml/h (M = 5,56, ds = 1,15) y pacientes confirmados con GD: 0,82- 2,88 nmol/ml/h (M = 1,64, ds = 0,57). El punto de corte entre deficientes y controles fue 3,22 nmol/ml/h, obtenido a partir de análisis ROC (99 % confianza, 100 % sensibilidad y 100 % especificidad). El protocolo permitió evidenciar la deficiencia en todos los casos de GD, confirmados mediante el análisis en paralelo de la enzima en aislamiento leucocitario. Se recomienda el uso del CBE y realizar la elución del corte a 5 mm, a fin de llevar a cabo la valoración enzimática con un volumen mayor aproximado de sangre y en ausencia de la actividad generada por la isoforma neutra.

Biografía del autor/a

Ana Camila Vásquez-Salazar, Universidad de los Andes

Centro de Investigaciones en Bioquímica (CIBI), Departamento de Ciencias Biológicas, Universidad de los Andes. Bogotá, Colombia.

Alfredo Uribe-Ardila, Universidad de Los Andes

Centro de Investigaciones en Bioquímica (CIBI), Departamento de Ciencias Biológicas, Universidad de los Andes. Bogotá, Colombia.

Descargas

Los datos de descargas todavía no están disponibles.

Biografía del autor/a

Ana Camila Vásquez-Salazar, Universidad de los Andes

Centro de Investigaciones en Bioquímica (CIBI), Departamento de Ciencias Biológicas, Universidad de los Andes. Bogotá, Colombia.

Alfredo Uribe-Ardila, Universidad de Los Andes

Centro de Investigaciones en Bioquímica (CIBI), Departamento de Ciencias Biológicas, Universidad de los Andes. Bogotá, Colombia.

Referencias bibliográficas

Palau F. Rare diseases, an emergent paradigm in the medicine of the XXI century. Med Clin (Barc) [Internet]. 2010;134(4):161-168. https://doi.org/10.1016/j.medcli.2009.06.038

Pérez-Calvo JI, coordinador. Actualización en enfermedad de Gaucher [Internet]. Fundación Española de Enfermedades Lisosomales (FEEL) y Sistema Nacional de Salud, Comisión de Formación Continuada (CFC). 2008;70. Disponible en: http://2011.elmedicointeractivo.com/Documentos/doc/GAUCHER.pdf

Rua-Elorduy MJ. Enfermedades metabólicas lisosomales. Manifestaciones osteoarticulares. Protoc Diagnter Pediatr [Internet]. 2014;(1):231-239. Disponible en: https://www.academia.edu/27694493/Enf_metabolicas_lisosomales

Uribe A, Giugliani R. Selective screening for lysosomal storage diseases with dried blood spots collected on filter paper in 4,700 high-risk Colombian subjects. JIMD Rep [Internet]. 2013;(11):107-116. https://doi.org/10.1007/8904_2013_229

Wilches R, Vega H, Echeverri O, Barrera LA. Los haplotipos colombianos de la mutación N370S causante de la enfermedad de Gaucher pueden provenir de un haplotipo ancestral común. Biomédica [Internet]. 2006;26(3):434-441. Disponible en: https://bit.ly/3n4PJ5r

Michelin K, Wajner A, Bock H, Fachel Â, Rosenberg R, Flores-Pires R, et al. Biochemical properties of β-glucosidase in leukocytes from patients and obligated heterozygotes for Gaucher disease carriers. Clin Chim Acta [Internet]. 2005;362(1-2):101-9. https://doi.org/10.1016/j.cccn.2005.06.010

Lozano-Bernal JE. Enfermedad de Gaucher. Casuística del Tolima. Acta Médica Colomb [Internet]. 2006;31(4):416-421. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-24482006000400005

Sánchez KL, Quintana AN, Carreras IN, Otero AG, Svarch E, García SMH, et al. Aspectos clínicos, bioquímicos, moleculares y tratamiento de 2 pacientes con enfermedad de Gaucher. Rev Cuba Hematol Inmunol y Hemoter [Internet]. 2010;26(1):54-61. Disponible en: https://bit.ly/33e2l26

Colquicocha-Murillo M, Cucho-Jurado J, Eyzaguirre-Zapata RM, Manassero-Morales G, Moreno-Larrea M del C, Salas-Arbizu KL, et al. Guía para diagnóstico y tratamiento de la enfermedad de Gaucher. Rev Médica Hered [Internet]. 2015;26(2):103-121. https://doi.org/10.20453/rmh.v26i2.2447

Grabowski GA, Horowitz M. 2 Gaucher's disease: molecular, genetic and enzymological aspects. Baillieres Clin Haematol [Internet]. 1997;10(4):635-656. https://doi.org/10.1016/S0950-3536(97)80032-7

Grabowski GA. Lysosomal storage disease 1. Phenotype, diagnosis, and treatment of Gaucher's disease. The Lancet [Internet]. 2008 [citado 2020 ene. 21];(372):1263-1271. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(08)61522-6

Liou B, Kazimierczuk A, Zhang M, Scott CR, Hegde RS, Grabowski GA. Analyses of variant acid-glucosidases effects of Gaucher disease mutations. J Biol Chem [Internet]. 2006 [citado 2020 ene. 21];281(7):4242-4253. https://doi.org/10.1074/jbc.M511110200

Grabowski GA. Gaucher disease: lessons from a decade of therapy. J Pediatr [Internet]. 2004;144(5 Suppl.):S15-S19. https://doi.org/10.1016/j.jpeds.2004.01.050

Stroppiano M, Calevo MG, Corsolini F, Cassanello M, Cassinerio E, Lanza F, et al. Validity of β-d-glucosidase activity measured in dried blood samples for detection of potential Gaucher disease patients. Clin Biochem [Internet]. 2014;47(13-14):1293-1296. https://doi.org/10.1016/j.clinbiochem.2014.06.005

XIII Congreso Colombiano de Genética Humana y VII Congreso Internacional. Genética médica y dismorfología. Latin American Journal of Human Genetics [Internet]. 2014;2(1):44-136. Disponible en: https://latinhumangenetics.com/pdfs_documents/LatinHuman_9resumenes.pdf

Sibille A, Eng CM, Kim SJ, Pastores G, Grabowski GA. Phenotype/genotype correlations in Gaucher disease type I: clinical and therapeutic implications. Am J Hum Genet [Internet]. 1993 [citado 2020 ene. 21];52(6):1094-1101. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1682271/

Bennett LL, Mohan D. Gaucher disease and its treatment options. Ann Pharmacother [Internet]. 2013;47(9):1182-1193. https://doi.org/10.1177/1060028013500469

Bennett LL, Turcotte K. Eliglustat tartrate for the treatment of adults with type 1 Gaucher disease. Drug Des Devel Ther [Internet]. 2015;9:4639-4647. https://doi.org/10.2147/DDDT.S77760

Wenger DA, Clark C, Sattler M, Wharton C. Synthetic substrate ß‐glucosidase activity in leukocytes: a reproducible method for the identification of patients and carriers of Gaucher's disease. Clin Genet [Internet]. 1978;13(2):145-153. https://doi.org/10.1111/j.1399-0004.1978.tb04242.x

Raghavan SS, Topol J, Kolodny EH. Leukocyte β-glucosidase in homozygotes and heterozygotes for Gaucher disease. Am J Hum Genet [Internet]. 1980;32(2):158-173. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1686022/

Daniels L, Glew R. B-glucosidase assays in the diagnosis of Gaucher's disease. Clin Chemestry [Internet]. 1982;28(4):569-577. https://doi.org/10.1093/clinchem/28.4.569

Uribe A, Arevalo I, Pacheco N. Over-expression of beta-glucosidase isoforms related to false negatives in diagnostic tests for Gaucher disease. Revista de Gastroenterología del Perú [Internet]. VIII Congreso de Errores Innatos del Metabolismo y Pesquisa Neonatal. Cusco, Perú. 2011;31(1):82-83. Disponible en: https://bit.ly/2SayWzJ

Uribe A, Pacheco N. A modified method for the determination of acid beta-glucosidase in dried blood spot samples as a diagnostic approach in the andean countries: preliminary results. En: Proceedings of the 11th European Working Group on Gaucher Disease (EWGGD) Haifa, Israel [Internet]. 2014. https://doi.org/10.13140/RG.2.2.24133.14567

Yıldırım Sözmen E, Dondurmacı M, Kalkan Uçar S, Çoker M. False positive diagnosis of lysosomal storage disease based on dried blood spot sample; leucocyte number of a challenging factor. J Pediatr Res [Internet]. 2018;5(Suppl. 1)17-21. https://doi.org/10.4274/jpr.33042

Chamoles NA, Blanco M, Gaggioli D, Casentini C. Gaucher and Niemann-Pick diseases - enzymatic diagnosis in dried blood spots on filter paper: retrospective diagnoses in newborn-screening cards. Clin Chim Acta [Internet]. 2002;317(1-2):191-197. https://doi.org/10.1016/S0009-8981(01)00798-7

Civallero G, Michelin K, de Mari J, Viapiana M, Burin M, Coelho JC, et al. Twelve different enzyme assays on dried-blood filter paper samples for detection of patients with selected inherited lysosomal storage diseases. Clin Chim Acta [Internet]. 2006;372(1-2):98-102. https://doi.org/10.1016/j.cca.2006.03.029

Peters SP, Coyle P, Glew RH. Differentiation of β-glucocerebrosidase from β-glucosidase in human tissues using sodium taurocholate. Arch Biochem Biophys [Internet]. 1976;175(2):569-582. https://doi.org/10.1016/0003-9861(76)90547-6

Rodrigues MDB, de Oliveira AC, Müller KB, Martins AM, D'Almeida V. Chitotriosidase determination in plasma and in dried blood spots: a comparison using two different substrates in a microplate assay. Clin Chim Acta [Internet]. 2009;406(1-2):86-88. https://doi.org/10.1016/j.cca.2009.05.022

Reuser AJ, Verheijen FW, Bali D, van Diggelen OP, Germain DP, Hwu WL, et al. The use of dried blood spot samples in the diagnosis of lysosomal storage disorders - Current status and perspectives. Mol Genet Metab [Internet]. 2011;104(1-2):144-148. https://doi.org/10.1016/j.ymgme.2011.07.014

Daitx VV, Mezzalira J, Goldim MP de S, Coelho JC. Comparison between alpha-galactosidase A activity in blood samples collected on filter paper, leukocytes and plasma. Clin Biochem [Internet]. 2012;45(15):1233-1238. https://doi.org/10.1016/j.clinbiochem.2012.04.030

Shapira E. Biochemical genetics: a laboratory manual. Oxford University Press; 1989. 145 p.

Olivova P, Cullen E, Titlow M, Kallwass H, Barranger J, Zhang K, et al. An improved high-throughput dried blood spot screening method for Gaucher disease. Clin Chim Acta [Internet]. 2008;398(1-2):163-164. https://doi.org/10.1016/j.cca.2008.08.024

Cómo citar
Vásquez-Salazar, A. C., & Uribe-Ardila, A. . (2021). Análisis de beta-glucosidasa en sangre seca recolectada en papel filtro (DBS), reporte de un nuevo método aplicado a población control y pacientes con sospecha de enfermedad de Gaucher. Revista Med, 28(2), 35–48. https://doi.org/10.18359/rmed.4857
Publicado
2021-06-04
Sección
Artículos

Métricas

Crossref Cited-by logo
QR Code