Extracción del cromosoma completo del fitoplasma presente en urapanes (Fraxinus sp.), por electroforesis de campo pulsado

  • Paula Andrea Mugno Ramírez Universidad Militar Nueva Granada.
  • Juan José Filgueira Duarte Universidad Militar Nueva Granada.
Palabras clave: Urapán, Fitoplasmas “Ash Yellows”, Electroforesis de Campo Pulsado, PCR, cromosoma completo

Resumen

Con el fin de purificar el ADN genómico del fitoplasma que afecta a los Urapanes de Bogotá, se realizó introducción de fitoplasmas, utilizando la ectoparásita Cúscuta subinclusa, a plantas jóvenes de Urapán, a partir de árboles sintomáticos de fitoplasmosis presentes en la Universidad Militar. La presencia de fitoplasmas fue confirmada en 14 de los 16 Urapanes receptores por medio del test DAPI. Solamente el 12.5% de los Urapanes receptores fue positivo por reacción en cadena de la polimerasa (PCR), con el par de primers universales para fitoplasmas R16F2n/R16R2. El producto de PCR obtenido a partir de amplificados de ADN de urapanes receptores con los primers R16F2n/R16R2 fue secuenciado y el análisis de la secuencia mostró similaridad entre el 99% y el 100% con fitoplasmas de distintos tipos. Se realizaron ensayos de Electroforesis de Campo Pulsado (ECP), con los sintomáticos de fitoplasmosis, pero no se obtuvieron bandas a pesar de que se utilizaron grandes cantidades de tejido. Con base en los resultados obtenidos en las pruebas moleculares, se concluyó que las plantas jóvenes de Urapán no son un buen reservorio para el aislamiento de ADN genómico de fitoplasmas. Se realizó introducción de fitoplasmas a plantas de Apio a partir de los Urapanes sintomáticos de la Universidad Militar, para tratar de encontrar un nuevo reservorio para el aislamiento de ADN genómico de fitoplasmas. Los Las plantas de apio infectadas resultaron positivas por PCR con el par de primers universales para fitoplasmas PhyRNAF3.3/R16R2. En los ensayos de ECP con Apio se obtuvieron bandas de aproximadamente 1125 Kb que se purificaron y se amplificaron por PCR con los primers PhyRNAF3.3/R16R2. El producto obtenido se mandó a secuenciar y se obtuvo similaridad del 99% con secuencias de tipo "Ash Yellows", incluidas dos secuencias reportadas en 2004 por el grupo de Biotecnología Vegetal de la Universidad Militar.

Descargas

La descarga de datos todavía no está disponible.

Referencias Bibliográficas

- Christensen N, Axelsen K, Nicolaisen M, Schulz A. 2005. Phytoplasmas and their interactions with hosts. Trends in Plant Science. 10: 526-534.

- Davis RE, Sinclair WA. 1998. Phytoplasma Identity and Disease Etiology. Phytopathology 88:1372-1375.

- Firrao G, Smart C, Kirkpatrick B. 1996. Physical map of the western X-disease phytoplasma chromosome. Journal of Bacteriology. 178: 3985-3988.

- Gaitán S. 2003. Detección y caracterización molecular de fitoplasmas tipo “Ash Yellows” en Urapanes de Bogotá. Tesis de maestría. Postgrado Interfacultades en Microbiología. Universidad Nacional de Colombia. Microbiología. Universidad Nacional de Colombia.

- Gutierrez C. 2006. Variabilidad molecular de fitoplasmas asociados a Fraxinus sp. en Colombia. Tesis de maestría. Postgrado Interfacultades en Microbiología. Universidad Nacional de Colombia.

- Liefting L, Kirkpatrick B. 2003. Cosmid Cloning and sample sequencing of the genome of the uncultivable mollicute, Western X-disease phytoplasma, using DNA purified by pulsed-field gel electrophoresis. FEMS Microbiology Letters. 221: 203-211.

- López K. 2005. Infección y concentración de fitoplasmas tipo AshY en Catharanthus roseus a partir de árboles de Fraxinus sp. infectados. Tesis de pregrado. Universidad Militar “Nueva Granada”. Facultad de ciencias.

- Marcone C, Neimark H, Ragozzino A, Lauer U, Seemüller E. 1999. Chromosome sizes of phytoplasmas composing major phylogenetic groups and subgroups. Phytopathology. 89: 805-810.

- Marcone C, Ragizzino A, Camele I, Rana G, Seemüller E. 2001. Updating and extending genetic characterization and classification of phytoplasmas form wild and cultivated plants in southern Italy. Journal of Plant Pathology. 83: 133-138.

- Oshima K, Kakizawa S, Nishigawa H, Jung H, Wei W, Susuki S, Arashida R, Nakata D, Miyata S, Ugaki M, Namba S. 2003. Reductive evolution suggested from the complete genome sequence of a plant-pathogenic phytoplasma. Nature on line. pp. 1-3.

- Padovan A, Firrao G, Schneider B, Gibb K. 2000. Chromosome mapping of the sweet potato little leaf phytoplasma reveals genome heterogeneity within the phytoplasmas. Microbiology. 146: 893-902.

Cómo citar
Mugno Ramírez, P. A., & Filgueira Duarte, J. J. (2017). Extracción del cromosoma completo del fitoplasma presente en urapanes (Fraxinus sp.), por electroforesis de campo pulsado. Revista Facultad De Ciencias Básicas, 4(1-2), 84-93. https://doi.org/10.18359/rfcb.2234
Publicado
2017-01-24
Sección
Artículos
Crossref Cited-by logo