Optimización del protocolo para la extracción y la cuantificación de proteínas totales en semillas germinadas de maíz (Zea mays L.)

  • Yaned Milena Correa Navarro Universidad de Caldas
  • Laura María Buriticá Salazar Universidad de Caldas
  • Juan David Rivera Giraldo Universidad de Caldas
  • Juan Pablo Penagos González Universidad de Caldas
  • Javier Ignacio Torres Osorio Universidad de Caldas
Palabras clave: Evaluación de proteínas totales, análisis de biomoléculas, método espectrofotométrico, lixiviación, Bradford

Resumen

El maíz (Zea mays L.) es el cereal de mayor cultivo a nivel mundial, del cual se pueden obtener para consumo humano, harina, fibra, aceite y proteínas; de estas últimas se han aislado diferentes tipos tales como albúminas, globulinas, prolaminas y gluteninas; sin embargo, dada la variedad de estas biomoléculas, su obtención no ha sido fácil. Este trabajo se realizó para determinar el mejor método para la extracción y la cuantificación de las proteínas totales en semillas germinadas de maíz (Zea mays L.), para lo cual se compararon seis protocolos de extracción que resultaron al combinar dos métodos físicos convencionales: agitación orbital o asistida con ultrasonido, y tres solventes de extracción: ácido tricloroacético, Tris-Base y Tris-HCl. Previamente se eligió el mejor método de cuantificación por espectroscopía de ultravioleta visible empleando los reactivos cromogénicos de: Lowry, Bio-Rad y Bradford. Los mejores resultados (10,83 mg/l de proteína) se obtuvieron con la extracción asistida con ultrasonido en combinación con Tris-Base y empleando el reactivo de Bradford para la generación del color y la posterior cuantificación por espectroscopía de ultravioleta-visible.

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Referencias bibliográficas

Aminian M. Nabatchian F. Vaisi-Raygani A. y Torabi M. 2013. Mechanism of coomassie brilliant blue G-250 binding to cetyltrimethylammonium bromide: an interference with the Bradford assay. Analytical Biochemistry, 434: 287-291.

Aspelund M.T. 2010. Membrane-based separations for solid/liquid clarification and protein purification. Graduate Theses and Dissertations. Paper 11771.

Aspelund M.T. y Glatz C.E. 2010. Purification of recombinant plant-made proteins from corn extracts by ultrafiltration. Journal of Membrane Science, 353: 103-110.

Asturias M.A. 2004. Maíz, de alimento sagrado a negocio del hambre. Acción ecológica. Red por una América Latina libre de transgénicos. Hivos. Quito. p. 9-26.

BIO-RAD Protein Assay. http://www.bio-rad.com/LifeScience/pdf/Bulletin_9004.pdf y http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_1069.pdf. Páginas consultadas el 19 de agosto de 2014.

Bodzon-Kulakowska A. Bierczynska-Krzysk A. Dylag T. Drabik A. Suder P. Noga M. Jarzebinska J. y Silberring J. 2007. Methods for samples preparation in proteomic research. Journal of Chromatography B, 849: 1-31.

Bradford M.M. 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry, 72: 248-254.

Cho K. Torres N.L. Subramanyam S. Deepak S.A. Sardesai N. Han O. Williams C.E. Ishi H. Iwahashi H. y Rakwal R. 2006. Protein extraction/solubilization protocol for monocot and dicot plant gel-based proteomics. Journal of Plant Biology, 49: 413-420.

FAO, Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación. 2010. Trends in the Crop Sector: FAO. http://www.fao.org/docrep/015/i2490e/i2490e03b.pdf.

FENALCE. 2010. El cultivo del maíz, historia e importancia. El Cerealista. Colombia.

García H. y Vázquez R. 1998. Cuantificación de proteínas: Una revisión. BioTecnología, 3: 77-88.

G-BIOSCIENCES. A Geno Technology, Inc. (USA) Brand 2014.

Ghafoor A. Ahmad Z. Qureshi A.S. y Bashir M. 2002. Genetic relationship in Vigna mungo (L.) Hepper and V. radiata (L.) R. Wilczek based on morphological traits and SDS-PAGE. Euphytica, 123: 367-378.

Görg A. Weiss W. y Dunn M.J. 2004. Current two-dimensional electrophoresis technology for proteomics. Review. Proteomics, 4: 3665-3685.

Horax R. Hettiarachchy N. Kannan A. y Chen P. 2011. Protein extraction optimization, characterization, and functionalities of protein isolate from bitter melon (Momordica charantia) seed. Food Chemistry, 124: 545-550.

http://info.gbiosciences.com/blog/bid/152959/What-is-the-Role-of-Buffer-System-in-Protein-Extraction-and-Clarification. Página consultada el 19 de febrero de 2015.

Kellogg E.A. 2001. Evolutionary history of the grasses. Plant Physiology, 125: 1198–1205

Ku H-K. Lim H-M. Oh K-H. Yang H-J. Jeong J-S. y Kim S-K. 2013. Interpretation of protein quantitation using the Bradford assay: Comparison with two calculation models. Analytical Biochemistry, 434: 178-180.

Lowry O.H. Rosebrough N.J. Farr A.L. y Randall R.J. 1951. Protein measurement with the Folin phenol reagent. The Journal of Biological Chemistry, 193: 265-275.

Moure A. Sineiro J. Domínguez H. y Parajó J.C. 2006. Functionality of oilseed protein products: A review. Food Research International, 39: 945-963.

Natarajan S. Xu C. Caperna T.J. y Garrett W.M. 2005. Comparison of protein solubilization methods suitable for proteomic analysis of soybean seed proteins. Analytical Biochemistry, 342: 214–220.

Paniwnyk L. Beaufoy E. Lorimer J. P. y Mason T.J. 2001. The extraction of rutin from flower buds of sophora japonica. Ultrasonics Sonochemistry, 8: 299-301.

Ranjan S. Matcha R. Madhuri B. y Babu N. 2012. Comparative evaluation of protein extraction methods from few leguminous seeds. International Journal of Advanced Biotechnology and Research, 3: 558-563.

Rostagno M.A. y Prado J.M. 2013. Natural product extraction: principles and applications. The Royal Society of Chemistry, Londres: RSC Publishing. 89-104.

Shukla R. y Cheryan M. 2001. Zein: the industrial protein from corn. Industrial Crops and Products, 13: 171-192.

Singh N. Jain N. Kumar R. Jain A. Singh N.K. y Rai V. 2015. A comparative method for protein extraction and 2-D gel electrophoresis from different tissues of Cajanus cajan. Frontiers in Plant Science. 6:606.

Skoog D.A. Holler F.J. y Crouch S.R. 2008. Principios de análisis instrumental. Sexta edición. Cengage Learning Editores. México D.F.

Tavakolipour H. Bagheri L. y Madadlou A. 2015. Pomegranate seed oil-loaded particles of the zein cross-linked with citric acid. Journal of Food Process Engineering, 38: 49-56.

Wegary D. Labuschagne M.T. y Vivek B.S. 2011. Protein quality and endosperm modification of quality protein maize (Zea mays L.) under two contrasting soil nitrogen environments. Field Crops Research, 121: 408-415.

Cómo citar
Correa Navarro, Y. M., Buriticá Salazar, L. M., Rivera Giraldo, J. D., Penagos González, J. P., & Torres Osorio, J. I. (2017). Optimización del protocolo para la extracción y la cuantificación de proteínas totales en semillas germinadas de maíz (Zea mays L.). Revista Facultad De Ciencias Básicas, 13(1), 65–68. https://doi.org/10.18359/rfcb.2756
Publicado
2017-02-07
Sección
Artículos

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